申論 5某生物技術公司計畫以蛋白質A為標的分子，製造專一性抗體（anti-Aantibody）開發具特異性之抗移植排斥藥物。為生產具有優良功效的抗體，該公司先從細胞中選殖（clone）蛋白質A的基因，利用重組基因工程技術生產、大量製造並純化蛋白質A，作為製造蛋白質A單株抗體（monoclonalantibody）的抗原。試回答下列問題：㈠說明選殖蛋白質A所需之完整模板基因序列（template DNA）的重要步驟。（5分）㈡該公司預計將所選殖的模板基因剪接到下圖所示載體（vector），大量表現並純化蛋白質A。請問應將所選殖的模板基因剪接插入載體的那一區段？並說明在設計操作此基因重組剪接過程中，欲成功表現大量蛋白質A所必須考慮的重要因素。（5分）㈢該公司在常見的蛋白質純化方法中，應選擇那一種蛋白質純化技術原理，方能最簡便且有效分離純化到高純度的蛋白質A？並試述該技術之原理、關鍵材料與步驟流程。（10分）㈣該公司另外將構築完成已攜帶蛋白質A完整基因序列的上述載體殖入大腸桿菌，嘗試利用大腸桿菌表現蛋白質A。假設蛋白質A可在大腸桿菌表現，也可經蛋白質純化過程獲得足量的蛋白質A，但卻發現純化的蛋白質A喪失其應有的功能。試述利用大腸桿菌所製造純化之蛋白質A喪失其功能的可能原因。（5分）P T7 / Lac O / RBSBseR IRsrIIMluITEVpEX-C-HisVector4.6 kbStopT7 Terminator